Desarrollo de herramientas biotecnológicas para la mejora genética de Prunus domestica

Abstract

El ciruelo europeo (Prunus domestica L.) es una de las especies más relevantes a nivel económico dentro de los frutales de Carozo, siendo la variedad ‘D´Agen’ la más cultivada en nuestro país. El mejoramiento clásico de los frutales de carozo se realiza mediante cruzamientos entre parentales seleccionados y la evaluación y selección de la progenie resultante. Si bien este enfoque ha permitido obtener variedades elite en casi todas las especies del género Prunus, presenta limitaciones entre las cuales se encuentran los extensos ciclos reproductivos y largos periodos juveniles, siendo de entre 5-6 años en ciruelo. A esto se suma el tiempo necesario para la expresión completa del potencial genético y la evaluación de caracteres en distintos ambientes, totalizando unos 12-15 años para obtener una nueva variedad. El desarrollo de herramientas biotecnológicas, como la transformación genética, podría permitir la obtención de variedades mejoradas de forma discreta en un plazo relativamente corto. Sin embargo, a pesar de los esfuerzos por establecer protocolos eficientes de mejoramiento genético aplicables, en ciruelo europeo solo se han transformados unas pocas variedades y en la mayoría de los casos las eficiencias de transformación son bajas. El objetivo general de este trabajo fue desarrollar herramientas biotecnológicas para la mejora de ciruelo europeo. Para lo cual se construyó el vector pMDC32-ptFT1 el cual permitirá, en un futuro, su utilización para la transformación genética de frutales como ciruelo y duraznero, con el fin de acortar sus ciclos reproductivos mediante la expresión del gen ptFT1. Se definió también 5 mg/l como la concentración de Higromicina a utilizar en la selección de transformantes en futuros ensayos de transformación de cotiledones ‘D´Agen’ Se logró la transformación de diferentes cepas de A. tumefaciens con el vector pCAMBIA2301, sentando bases para futuros ensayos que permitan determinar y comparar su capacidad de transformación mediante la expresión de GUS en distintos tejidos. También se estableció la sensibilidad de las cepas a los antibióticos Cefotaxima y Timetina, siendo 100 mg/l y 75 mg/l respectivamente, las concentraciones que inhiben el crecimiento de las mismas. Se logró la transformación transiente de hojas y cotiledones de 'D'Agen'. En cotiledones se estudió el efecto del estado fisiológico de la bacteria, la sonicación y la aplicación de vacío, sobre la expresión transiente del gen GUS. Y si bien no se obtuvo un modelo estadísticamente significativo, se identificaron factores que afectan la expresión transiente de GUS. Este trabajo representa el primer reporte sobre la transformación transiente de hojas y cotiledones de la variedad ‘D´Agen’.