Determinación molecular de agentes bacterianos difíciles de cultivar en semen bovino criopreservado de origen comercial

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de genes de Mycoplasma spp., Chlamydia spp. y Ureaplasma spp. en muestras de semen bovino criopreservado de origen comercial mediante la técnica molecular de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), y correlacionar la presencia de los mismos con ciertos parámetros de calidad seminal. Para ello se utilizaron 94 pajuelas de semen bovino criopreservadas de origen comercial, provenientes de 60 toros de 7 centros de reproducción. Las muestras almacenadas en nitrógeno líquido fueron descongeladas y se determinó la movilidad espermática total (MET) y movilidad rectilínea progresiva (MRP) en dos tiempos (T1: momento de descongelación y T2: 120 minutos post-descongelación). La integridad de la membrana plasmática (IMP) se evaluó usando tinción eosina y nigrosina. La funcionalidad de la membrana plasmática (FMP) del compartimiento flagelar se determinó mediante el test de endósmosis (Hos-Test). Se extrajo el ADN de cada pajuela para la detección molecular de los genes correspondientes a Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum, Ureaplasma diversum y Chlamydia spp. mediante el empleo de técnicas de PCR con primers específicos, utilizando un termociclador (BioRad). Al finalizar las reacciones de PCR, se realizó una corrida electroforética en geles de agarosa al 2%, y se empleó bromuro de etidio para observar los amplicones bajo un transiluminador UV-Visible. Se determinó la presencia de Mycoplasma californicum en 41% (38/94) de las muestras, de Mycoplasma bovigenitalium en 22% (21/91), Ureaplasma diversum en 11% (11/94), Chlamydia spp 23S en el 47% (44/94) y Chlamydia spp. 16S en 7% (7/94). No se detectó la presencia de la secuencia génica de Mycoplasma bovis. Se observó una tendencia de que la presencia de genes de U. diversum afecta negativamente la movilidad espermática total y la movilidad rectilínea progresiva sin afectar los demás parámetros. La presencia de genes de M. californicum, M. bovigenitalium y Chlamydia spp. (16S y 23S) en las pajuelas analizadas no afectó las variables de calidad seminal en ninguno de los tiempos evaluados. Se concluye que es posible detectar genes correspondientes a Mycoplasma californicum, Mycoplasma bovigenitalium, Ureaplasma diversum y Chlamydia spp. (genes 23S y 16S) en semen bovino criopreservado de origen comercial, y que la presencia de Ureaplasma diversum podría ser capaz de afectar los parámetros de motilidad seminal en las muestras de semen criopreservado analizadas.