Acción del ácido hialurónico sulfatado sobre monocitos/macrófagos en un contexto de carcinoma pulmonar

Abstract

Introducción: el cáncer de pulmón no microcítico, es el tipo de tumor pulmonar más frecuente y tiene una tasa de supervivencia media-baja, tanto a nivel mundial como en Argentina. Ya que no hay un solo tratamiento, es necesario buscar una opción terapéutica que complemente a la actual dirigida a bloquear el crecimiento tumoral a través de la modulación tanto de las células tumorales como su entorno o microambiente, formado por otros tipos celulares, factores solubles y moléculas de la matriz extracelular. En los últimos años, surgieron potenciales aplicaciones clínicas en la terapia tumoral que involucran a la familia del Ácido Hialurónico (AH). Este es un polisacárido glucosaminoglicano presente en la mayoría de los tejidos como componente de la matriz extracelular, capaz de modular el sistema inmune. El uso exógeno de derivados químicos del AH, como es el caso del ácido hialurónico sulfatado (AHs) puede ser una estrategia emergente para modular dicha respuesta en el contexto tumoral. El AHs es un tipo de AH modificado químicamente con distintos grados de sulfatación, y que puede ser utilizado como terapia adyuvante debido a que se ha observado que tiene una acción antiangiogénica y antitumoral en algunos tipos de cáncer. Además, conociendo que los monocitos/macrófagos (Mo/MØ) son moduladores críticos del microambiente tumoral se evaluará el impacto del uso de AHs sobre esta población como indicativo de regulación de la respuesta inmune. Objetivo: debido a que la función del AHs está escasamente estudiada en células inmunes y no hay estudios de AHs en Mo/MØ en un contexto tumoral, el objetivo general de este trabajo consistió en evaluar el efecto de AHs, con distintos grados de sulfatación, sobre Mo/MØ y su relación con la angiogénesis y progresión tumoral en un modelo de carcinoma pulmonar. Métodos: para evaluar el efecto del AHs sobre células de carcinoma pulmonar, se cultivó la línea H1299 en condiciones estándar de cultivo y se trató con AHs 1 (parcial) o 3 (total). Posteriormente, se realizaron ensayos de (a) viabilidad (MTS), (b) citotoxicidad (LDH) y (c) formación de esferoides, midiendo en este último, el área de lastumorosferas. Para evaluar el efecto del AHs sobre Mo/MØ, se aislaron monocitos de sangre periférica de donantes sanos mediante un gradiente Ficoll-Percoll y se cultivaron en condiciones estándar de cultivo. Posteriormente, las células fueron tratadas con AHs 1 o 3 y medio condicionado de H1299 más AHs 1 o 3 y se realizaron ensayos de (a) viabilidad (MTS), (b) ELISA para detectar las citoquinas IL-1β, TNF-α y TGF-β y el factor angiogénico VEGF y (c) migración in vitro para evaluar la quimiotaxis de células endoteliales hacia los medios condicionados de Mo/MØ tratados. Para evaluar la interacción células inmune-célula tumoral, se analizó la acción de los Mo/MØ, tratados con AHs, sobre células tumorales de carcinoma pulmonar, se llevó a cabo un ensayo de formación de esferoides y se midió la capacidad de formación de tumorosferas o agregados celulares. Resultados: AHs3 a la concentración de 1.000 µg/ml disminuyó la viabilidad de las células H1299 e indujo citotoxicidad. Aún más, ambos tipos de AHs (1 y 3) disminuyeron el tamaño de las tumorosferas. Por otro lado, el tratamiento con AHs aumentó la viabilidad de los Mo/MØ, disminuyó la secreción de VEGF y redujo la migración de células endoteliales en un contexto de carcinoma pulmonar. Asimismo, el medio condicionado de Mo/MØ previamente tratados con AHs3 previno la formación de esferoides y aumentó la cantidad de agregados celulares. Sin embargo, el perfil de citoquinas secretadas por los Mo/MØ tratados con AHs, no se vio afectado. Conclusión: el AHs ejerce una acción antitumoral directa sobre células tumorales y es capaz de modular el comportamiento angiogénico y antitumoral de los Mo/MØ cuando son expuestos a un contexto de carcinoma pulmonar. Se requieren mayores investigaciones para entender el efecto del AHs sobre el fenotipo y comportamiento de los Mo/MØ y el rol que estos cumplen en la angiogénesis y progresión tumoral.